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无创性产前诊断胎儿遗传物质

2020-12-11 信息来源:

无创性产前诊断胎儿遗传物质(图1) 首先,说明胎儿的存在下的DNA在母体血浆和血清。 无细胞DNA所提供的胎儿遗传物质的新来源,无创性产前诊断。 他们开发了一种实时,定量的PCR聚合酶链反应(PCR)方法来测量的胎儿dna的浓度和分析SRY ,一个单拷贝的Y染色体特异性序列,来量化基因组当量的每毫升血液 的数量当妇女携带男性胎儿。
  结果表明,在母体血浆的DNA的胎儿DNA中的第一个和第三个三个月的浓度分别为3.4%和6.2% 。 他们估计平均为25.4份每母体血浆样本毫升胎儿DNA循环的早期妊娠。 他们还表明,分娩后,无细胞胎儿DNA从母体循环中清除 非常迅速,具有半衰期在分钟(3)的顺序。 因此,相对高浓度的胎儿无细胞的DNA表明,母体血浆用于诊断目的使用胎儿DNA时广泛而耗时的胎儿DNA的富集程序就没有必要。
  虽然胎儿无细胞的DNA分析的胎儿男女和恒河猴D状况的产前诊断的潜力已被提出,产前诊断的准确性还没有被描述。 如果胎儿男女可确定的,以测定X连锁遗传病侵入性操作的数目会减少。 本研究评估了使用从妊娠早期获得母体血浆游离DNA胎儿鉴定诊断的准确性。
  母体血液样品(10mL)中收集到含管的EDTA 离心30008在3小时内进行分离。 血浆转移到普通的聚丙烯管中,并通过离心30008.再 次分离上清液收集到新管中并保存在-20℃下直到进一步处理。 DNA从1.5毫升使用根据“血液和??体液协议”稍加修改的QIAamp血液 迷你试剂盒(Qiagen)进行血浆样品的提取。 DNA从柱中洗脱,用50微升的水。 虽然使用ABI PRISM 7700序列检测仪(Applied Biosystems)对母体血浆的DNA分析实时定量PCR测定已报道一些研究者 ),我们使用了的LightCycler(Roche Diagnostics公司),其是DNA的定量的可靠方法。 在Y染色体特异性序列,DYS-14, 在男性胎儿被用作分子标记进行量化的胎儿细胞的DNA。 在PCR反应体系为DYS-14序列组成的扩增引物DYS 14-713F(5'-CAT CCA CGT CCC 和DYS14-880R(5'-TTC CCC TTT GTTGTT葡萄糖耐量试验,看有CCC CAA 和双重标记的荧光探针DYS14-883T(5'-FAM-CGA AGC CGA GCT GCC CAT CA-TAMRA-3')。 的荧 光PCR反应按照制造商的在20微升反应体积与除从试剂组得到(的LightCycler-快速起动的DNA站长荧光探针和扩增引物的所有组分 的说明制备杂交 探头; 罗氏诊断)。 所提取的血浆DNA(13.1微升)用作各反应的模板。 热循环开始时,采用变性 在95℃下进行 10分钟,接着变性的40个循环,在95℃下进行10秒,退火:57 [度]下进行20秒,延伸72℃下进行20秒。 雄性存在于血浆样品中的 DNA的拷贝数通过用的雄性基因组DNA的校准稀释曲线进行比较来确定。
  该DYS14序列的拷贝通过用连续稀释,男性基因组DNA的标准曲线比较来确定。 的关系是线性的时,阈值循环作图对输入目标量,后 者绘制在一个共同的对数刻度。 校准曲线的相关系数为0.956?1.000。 从DNA的提取,随后通过定量PCR启动系统的计算出的一天 到一天的CV为5.3%(N = 7)。 我们增加了男性DNA(6.6纳克的全血DNA)的1000拷贝数到非妊娠妇女和提取后评价DNA回收的血浆 。 男性DNA的回收率平均为66.0%。
  从这些的孕妇的血浆样品进行重新分析的结果相对应的正确的胎儿的性别。

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